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赛默飞高效液相色谱仪的操作流程涵盖实验准备、仪器操作、数据处理及维护保养四个阶段，具体如下：
一、实验准备
1.流动相配制：
选用色谱纯（LC）级溶剂，确保溶剂质量符合分析要求。
使用0.45μm微孔滤膜过滤流动相，去除其中的颗粒物和杂质。
对过滤后的流动相进行超声脱气处理，脱气时间通常为10-20分钟，含缓冲盐的流动相需脱气5分钟，以防止气泡影响泵送精度。
2.色谱柱预处理：
根据分析目标选择合适的填料类型，如C18、硅胶柱等。
用流动相以1.0mL/min的流速平衡色谱柱，平衡时间通常为30-60分钟，期间需监测基线稳定性。
3.样品预处理：
所有样品需过滤去除颗粒物，以防止堵塞色谱柱或影响分析结果。
对于酸性样品，可加入1%醋酸以改善峰形。
对于碱性样品，可添加10-20mmol/L三乙胺以改善峰形。
二、仪器操作
1.开机自检：
依次启动泵、进样器、柱温箱和检测器电源。
等待1-2分钟，直至变色龙服务管理器激活。
双击电脑桌面的“Chromeleon 7”图标，进入色谱工作站。
2.管路排气：
拧松泵单元快速清洗阀（逆时针拧松一圈半到两圈）。
在软件中设置A通道流速为3.0mL/min，点击“冲洗”按钮，冲洗2分钟。
重复上述操作，分别进行B、C通道的管路冲洗排气，确保流动相连续无气泡。
冲洗结束停泵后，关闭（拧紧）清洗阀。
3.方法设置：
通过“创建”菜单设定仪器方法。
设置流动相比例（如A:C=40:60）、流速（如1.0mL/min）及检测波长（如230nm）。
将方法保存至Chromeleon 7软件固定文件夹。
4.样品分析：
将标准品和样品置于自动进样器固定位置。
启动序列分析，记录保留时间和峰面积数据。
三、数据处理
1.数据采集：
利用软件自动积分功能处理色谱图。
若出现拖尾峰或前沿峰，需调整流动相比例或更换色谱柱。
2.数据记录与报告：
记录目标峰的保留时间和峰面积。
如自动积分不正确，可利用手动积分删除峰，再进行手动积分处理。
根据需要生成分析报告，包括色谱图、峰面积、保留时间等数据。
四、维护保养
1.关机维护：
分析结束后，先用甲醇:水=5:95冲洗色谱柱30分钟。
再用100%甲醇冲洗色谱柱30分钟。
关闭软件后，从下至上依次关闭各单元电源。
关闭计算机，填写仪器使用记录。
2.日常维护：
每日用稀硝酸溶液超声清洗过滤器，避免盐类结晶堵塞管路。
保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。
定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。
3.色谱柱保护：
使用保护柱延长色谱柱寿命。
当柱压升高时，用异丙醇-二氯甲烷（1:1）冲洗反相柱，或用纯甲醇冲洗正相柱。
控制好流动相的pH值，对于硅胶基质色谱柱，流动相pH值需保持在2.5-7.0之间。
4.其他注意事项：
流动相使用不要超过两天，尤其是夏天，最好每天新鲜配制以免微生物的生长。
腐蚀性溶剂或缓冲液在泵内存放不可过夜，否则溶剂会对泵起腐蚀作用。使用腐蚀性物质后要冲洗，先用水后用甲醇。
避免超负荷进样，对250×4.6mm的柱子，绝对进样量应不超过100μg。
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赛默飞高效液相色谱的操作流程